domingo, 3 de noviembre de 2013

Reaccion en cadena de la polimerasa en un ACV


Los microARN proporcionan un control postranscripcional de la expresión génica y demuestran extensos cambios miARN después de la isquemia cerebral
Desde HSP70 y BCL2 reguladora de apoptosis son los principales protectores contra la muerte celular inducida por el estrés, hemos identificado un miRNA que podrían influir en estas proteínas clave.

miR181 y la lesión cerebral isquémica
Niveles de miARN fueron evaluados por cuantitativos RT-PCR y los niveles de mRNA por RT-PCR
En respuesta a accidentes cerebrovasculares miR-181 aumento en el núcleo, donde mueren las células, pero disminuyo en la penumbra, donde las células sobreviven
Los niveles de miR-181 cambian en respuesta a un accidente cerebrovascular y los niveles de manipulación de miR-181 cambia el volumen del infarto. Reducción de los niveles de miR-181 se asocian con un aumento de GRP78 y Bcl2 y protección de lesión isquémica in vivo e in vitro
En conclusión las miRNAs pueden proporcionar una nueva estrategia terapéutica para la protección de un derrame cerebral.

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Muestra biologica que se recoge para detectar el ACV y pasos para la extraccion de acido nucleico a partir de la muestra

Para este tipo de exámenes específico se recoge una muestra de sangre
La técnica de amplificación de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa es una técnica que consiste en tratar de replicar una y otra vez un mismo fragmento de ADN

Etapas en la extracción de ADN

1.Lisis de las células
Las sales caotrópicas ayudan a romper la estructura tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización  

2.Degradación de la fracción proteica asociada al ADN
Se consigue mediante la adición de una proteasa 

3.Purificación
Consta de 3 fases:
  • Precipitación del ADN: El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frío o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación.
  • Lavado del pellet: Se realiza con alcohol frío volviendo a centrifugarse
  • Recuperación: El sedimento se puede resuspender en agua o tampón Tris Tras sersecado completamente
La confirmación de la presencia de ADN se lleva a cabo mediante electroforesis en un gel
de agarosa y posterior tinción con bromuro de etidio y observación con luz UV  
Estos tres pasos constituyen un ciclo. La repetición de este ciclo unas 40 veces, por ejemplo, permite obtener, como resultado de un experimento de amplificación, millones de copias del fragmento de interés.

Referencias
 
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